Sanquin以非營(yíng)利為基礎(chǔ)在荷蘭提供血液服務(wù)。Sanquin是血液領(lǐng)域的知識(shí)研究所，在輸血醫(yī)學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域開展科學(xué)研究，將這些知識(shí)應(yīng)用于一系列制藥和診斷服務(wù)的開發(fā)和生產(chǎn)。

sanquin M1551說明書

Peliclass ELISA combikit IgG1 + 2 + 3 + 4

產(chǎn)品規(guī)格

文章編號(hào)

M1551

產(chǎn)品組

IgG亞類，Elisa

尺寸

4 x 48孔

技術(shù)

ELISA

血清中人IgG亞類的ELISA檢測(cè)試劑盒（EN）

ELISA kit for quantitative determination of human IgG subclasses in serum (en)

一、導(dǎo)言
人胰島素樣生長(zhǎng)因子包括四個(gè)亞類：胰島素樣生長(zhǎng)因子1、胰島素樣生長(zhǎng)因子2、胰島素樣生長(zhǎng)因子3和胰島素樣生長(zhǎng)因子4。Igg亞類的生物化學(xué)特性
Described Extensively（1-5）.在幾種生物重要功能中，如
抗原識(shí)別、補(bǔ)體活化和結(jié)合到細(xì)胞表面受體很多研究都揭示了血清中的異常
IGG亞類水平可能與各種疾病狀態(tài)有關(guān)。特別是選擇性IGG2亞類缺陷的組合
隨著病毒或細(xì)菌感染的易受感染性的增加，已大量記錄在案（4、5）。人胰島素樣生長(zhǎng)因子2或胰島素樣生長(zhǎng)因子3的低血清水平
報(bào)告的患者中有復(fù)發(fā)性上皮和低呼吸道感染。其他人建立了一個(gè)非常低的協(xié)會(huì)
血清濃度與中肺再生感染（6）子群血清中的異常也有
在自身免疫疾病、神經(jīng)疾病和艾滋病毒感染中觀察到（4）。
二技術(shù)原則
試劑盒英文名稱含有高涂層微粒條紋的試劑盒
禽單克隆抗體，每種抗體的一個(gè)亞類人的特異性。測(cè)試樣品，校準(zhǔn)和控制將被孵化
在各自的井里。被確定的Igg亞類將被固相結(jié)合，而非邊界Igg被清洗。Next，
過氧化物酶共軛抗人免疫血清添加到每個(gè)井中，洗滌后清除了非邊界共軛物。之后
用堿性溶液（ABTS）和H2O2進(jìn)行孵化，用酸性緩沖阻止反應(yīng)。綠色反應(yīng)產(chǎn)品是
在測(cè)試樣品中通過吸收和亞類Igg濃度的測(cè)定，與參考曲線的價(jià)值相對(duì)應(yīng)。
測(cè)定了IGG亞類控制血清的校準(zhǔn)曲線的有效性和IGG亞類的精度。
決定
根據(jù)WHO 67/97參考材料制備的校準(zhǔn)器確定了校準(zhǔn)器中的IGG亞類水平。茶
Recommended target values of 5.0 g/l for IGG1，2.6 g/l for IGG2，0.4 g/l for IGG3 and 0.5 g/l for IGG4 were used（7）.
三、儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
人骨髓細(xì)胞亞綱應(yīng)在2-8°C保持新版本，并可在標(biāo)簽上使用，直至期滿之日為止。
開放后所有部件的穩(wěn)定度為1周，在2-8°C時(shí)保存。
運(yùn)輸條件可能不同于儲(chǔ)存條件。
IV.Contents of the KIT
See the table at the beginning of this package insert.
人亞組蛋白含有足夠的反應(yīng)物，用于每個(gè)亞組的48個(gè)測(cè)試，包括校準(zhǔn)器、控制器和布蘭克。
用柱色譜法純化組織培養(yǎng)基中的單克隆抗體（離子交換與親和性）
色譜法校準(zhǔn)與控制是液體的人。
五.安全
本發(fā)明涉及一種含有危險(xiǎn)貨物的骨細(xì)胞抑制劑（HOLDS）酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）。

危險(xiǎn)象形圖：GHS07
信號(hào)詞：警告
危險(xiǎn)說明：
H319引起嚴(yán)重的眼睛刺激
預(yù)防說明：
P280佩戴護(hù)目/面部防護(hù)
P264處理后*洗手
P305+P351+P338如果進(jìn)入眼睛：用水小心沖洗幾分鐘。取下隱形眼鏡（如果有且容易取下）
做。繼續(xù)沖洗
p337+p313如果眼睛刺激持續(xù)：請(qǐng)就醫(yī)
六、所需附加材料
稀釋洗滌-稀釋-和基質(zhì)緩沖液的蒸餾水。
-準(zhǔn)確輸送體積的移液裝置。
-培養(yǎng)箱（37±2°C）。
-一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的酶聯(lián)免疫吸附洗滌器或一個(gè)500毫升的塑料噴水瓶，用于自動(dòng)或手動(dòng)清洗條帶。
-用于測(cè)量414 nm或405 nm吸光度的標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定儀。
日志線性紙。
七。試樣處理
只有血清樣本應(yīng)該被測(cè)試。樣品應(yīng)盡可能新鮮或冷凍保存。
使用前應(yīng)手動(dòng)稀釋樣品（見VLL分析方案）。
八。分析協(xié)議
-將所有試劑置于室溫（18-25°C）并充分混合。避免氣泡或泡沫。
建議對(duì)所有樣品、對(duì)照品和校準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行一式兩份的測(cè)試。
1。微量滴定板
Peliclass人IgG亞類酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒提供了在不同場(chǎng)合使用部分平板的靈活性。
打開塑料袋之前，確定測(cè)試所需樣品數(shù)量所需的條帶數(shù)量加上所需的14口井。
用于運(yùn)行校準(zhǔn)器、控件和空白兩份。從板架上拆下不使用的板條，然后重新包裝
含有干燥劑的塑料袋，存放溫度為2-8°C。

2。緩沖液配制
洗滌緩沖液：在950ml蒸餾水中加入洗滌緩沖液濃縮液瓶的總含量，制備洗滌緩沖液。
稀釋的洗滌緩沖液必須在2-8°C下儲(chǔ)存，并保持穩(wěn)定1周。
注：濃縮緩沖液可能含有鹽晶體。在制備工作強(qiáng)度緩沖液之前，將濃縮緩沖液加熱
短暫至37°C以溶解晶體。
稀釋緩沖液：計(jì)算所需稀釋緩沖液的數(shù)量（每個(gè)微孔條約2毫升未稀釋緩沖液），并制備
工作強(qiáng)度溶液，將緩沖液在蒸餾水中稀釋10倍。
三。校準(zhǔn)品和對(duì)照血清的制備
濃度見所附信息傳單的表2和表3。
校準(zhǔn)器：（見隨附信息傳單的表1）用“1:500”標(biāo)記一根10毫升試管，用“1:8”標(biāo)記八根3毫升試管。
分別。
將4.99毫升稀釋緩沖液移到10毫升的試管中，加入10μl的校準(zhǔn)血清（初始稀釋液1:500）。移液管1.9毫升
將標(biāo)有“cal1”和1.0 ml的試管中的稀釋緩沖液倒入標(biāo)有“cal2-cal8”的試管中。
將100μl 1:500稀釋校準(zhǔn)器移液管1，從該管中加入1.0 ml
上一次稀釋到下一個(gè)“校準(zhǔn)”管。為每個(gè)igg子類選擇校準(zhǔn)器稀釋系列：igg1 1:80000-1:1280000
igg2、igg3和igg4 1:10000-1:160000。
對(duì)照組：在一根試管上貼上“1:500”標(biāo)簽，兩根3毫升試管上貼上“1:30000”（用于IGG2、3、4）和“1:240000”（用于IGG1）標(biāo)簽。
管內(nèi)移液管用1:500毫升稀釋緩沖液和10升對(duì)照血清標(biāo)記。
移液管內(nèi)貼有1:30000 885μl稀釋緩沖液和15μl 1:500稀釋液的標(biāo)簽。
試管中的移液管標(biāo)記有1:240000 875μl稀釋緩沖液和125μl 1:30000稀釋液。
準(zhǔn)備一管3毫升的稀釋緩沖液作為空白。
4。樣品的制備
稀釋液與對(duì)照血清相同的稀釋液稀釋試驗(yàn)樣品。對(duì)于超出給定范圍的結(jié)果
范圍（見隨附信息傳單的表1），應(yīng)使用不同的樣品稀釋液重復(fù)試驗(yàn)。
5。次洗滌步驟
用洗滌緩沖液洗滌板架上所需的微孔四次。手動(dòng)清洗時(shí)，*注入井內(nèi)（>300
使用洗滌緩沖液并丟棄，重復(fù)此步驟三次。后，井應(yīng)該是*空的。隨后的
應(yīng)立即加入試劑，不要讓井長(zhǎng)時(shí)間干燥。
6。步孵化
將100微升稀釋的校準(zhǔn)器、對(duì)照品、樣品和空白物添加到適當(dāng)?shù)目字小?br />用粘合密封件蓋住板，輕敲微量滴定板邊緣幾秒鐘，輕輕攪拌，以混合每口井的內(nèi)容物。
在37°C下培養(yǎng)1小時(shí)。
清洗前，按照第8點(diǎn)所述準(zhǔn)備下一種培養(yǎng)試劑。

7。第二步，洗
吸入supernatant from the the井洗板5在AS點(diǎn)描述的程序辦理。
8。incubation共軛抗體與人IgG HRP—to
dilute by the共軛1∶500µL移液30毫升稀釋14.97 of the共軛到緩沖區(qū)。dilute共軛：繼續(xù)to the
1：3000×1.2毫升移液稀釋1：of the 500毫升稀釋到緩沖區(qū)6。
1：2000×2.0毫升移液稀釋1：of the 500毫升稀釋到緩沖區(qū)6。
1：1000×3.5毫升移液稀釋至1∶500 of the 3.5毫升稀釋緩沖。
of the 100µL：add to the 1:500稀釋抗IgG1的微孔條；
100µL of the 1:3000稀釋to the反IgG2的微孔條；
100µL of the 1:2000稀釋to the IgG3抗微孔條；
100µL of the 1:1000稀釋抗人IgG4 to the微孔條。
覆蓋板與粘接密封茶葉，攻絲模式邊緣輕輕（for a幾秒到the contents of each混合好。
在37°C孵育1小時(shí)）。
只是之前洗下incubation試劑準(zhǔn)備在10點(diǎn)和描述的程序辦理。
9。三步洗
吸入supernatant from the the井洗板5在AS點(diǎn)描述的程序辦理。
10。incubation與ABTS底物
底物溶液（calculate the amount of相角近似為0.9毫升的微孔條will be needed）。
equivalents add the solution of 200µL氫過氧化物的股票和股票400µL溶液20 mL of  ABTS的工作強(qiáng)度
底物緩沖液（18底物溶液2毫升+股票distilled毫升水）。
add to 100µL的底物溶液的井。
攻絲模式的邊緣輕輕地大一些microtitreplate for the seconds to the contents of each混合好。
在室溫孵育30分鐘換（18 - 25°C）。
11。停止酶反應(yīng)
50µL add to solution of停在井。
12。板讀取超時(shí)
在1小時(shí)內(nèi)（閱讀414 preferably）或安在405 nm）的閱讀器。
結(jié)果和解釋（九日。
absorbance at the -記錄（414 preferably for each 405 nm）或平均值和復(fù)制的好茶。
- duplicates should not for each樣品有什么區(qū)別，超過平均值15% from the。如果卵巢duplicates黑莓，should be the法
重復(fù)灌水。
圖- absorbances校準(zhǔn)器（the average of the Y軸）與茶相關(guān)的subclass毫微克/毫升的濃度（X軸）的在線日志線性
適合的擬合曲線和紙畫。
- the levels of the調(diào)控血清IgG subclass should FIPS在范圍（S）表3 of the given在封閉的信息傳單。
the average value for - each absorbances插值曲線上的參考樣品。
測(cè)試顯示均值- samples which the range of the“absorbance dilutions參考曲線，appropriately should be稀疏。
- subclass for an評(píng)價(jià)IgG濃度在測(cè)試樣品中出現(xiàn)found the levels，with the values for  normal IgG
subclasses（EEA X參考靶道）。

X.測(cè)定范圍
關(guān)于試劑盒特定的分析范圍，請(qǐng)參閱隨附信息傳單的表1。
四
十一。參考范圍
健康高加索個(gè)體血清樣品中IgG亞類的參考范圍（G/L）（8）。其他人群分開
應(yīng)獲得參考范圍。

注：
試驗(yàn)的具體性能特性所引用的值代表典型結(jié)果，不應(yīng)視為規(guī)范。
這個(gè)工具包。
十三。限制
1。用戶應(yīng)接受培訓(xùn)，熟悉酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和檢測(cè)程序。
2。不應(yīng)使用大量溶血或含脂樣品。對(duì)于含有
類風(fēng)濕因子，高膽紅素水平，或其他循環(huán)免疫復(fù)合物。這些樣品應(yīng)采用其他方法進(jìn)行分析。
三。超出范圍的樣品，如副蛋白，應(yīng)使用不同的稀釋液重復(fù)。
4。發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)IgG亞類的水平降低永遠(yuǎn)不能提供明確的診斷，但應(yīng)該考慮。
作為免疫系統(tǒng)紊亂的跡象，需要進(jìn)一步的診斷調(diào)查。
5。控制血清應(yīng)始終用于檢查校準(zhǔn)曲線的有效性。當(dāng)控件超出范圍時(shí)，
試驗(yàn)樣品不可靠。應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)。
6。不同批次的試劑不能互換。
7。剩余的試劑（如靜容量）不應(yīng)與新開小瓶的內(nèi)容物混合。
8。瓶蓋和小瓶不能互換。應(yīng)更換相應(yīng)小瓶上的瓶蓋。
9。盡管人類校準(zhǔn)品和對(duì)照血清已經(jīng)被檢測(cè)出特定疾病傳播因子的標(biāo)記物。
根據(jù)歐盟現(xiàn)行的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范指南，所有來源于人類的成分應(yīng)被視為
可能具有傳染性。
10。防腐劑：硫柳汞®0001%。
11。在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的每個(gè)培養(yǎng)/固定步驟中使用新的平板封條，以避免交叉污染。不要使用鋁
箔。
12。每次轉(zhuǎn)移時(shí)使用一次性移液管頭，以避免交叉污染。
13。每次使用該試劑盒時(shí)，應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)器、共軛物和緩沖器的新稀釋。
14。不要使用與試劑盒一起提供的試劑和微量滴定條。
15。疊氮化納滅活HRP，不使用含疊氮化納的溶液，也不向提供的緩沖液中添加疊氮化納。
16。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)定進(jìn)行廢物處理。

XIV. 參考

1. Shakib, F. (Editor), Monograph in Allergy, Karger A.G., 19 (1986). 2. Shakib, F. (Editor), The human IgG subclass, Pergamon Press (1990). 3. Vlug, A. et al., Eur. Clin. lab., 8:26 (1989). 4. Jefferis, R. et al Clin.Exp.Immunol. 81:357 (1990). 5. Hamilton, R.C., Clin. Chem., 33:1707 (1987). 6. Beck, C.S. and Heiner, D.C., Am. Rev. Respir. Dis., 124:94 (1981). 7. Klein, F et al., Clin. Chem. Acta., 150 119 (1985) 8. Vlug, A. et al., Ann. Biol. Clin. 52:561-67 (1994).

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