TGIRT™-III Enzyme

規(guī)格：

 10 Reactions (TGIRT10)

50 Reactions (TGIRT50)

5 x 50 µl (TGIRT5x50)

10 x 50 µl (TGIRT10x50)

單位定義：

TGIRT的一個單元® -III逆轉錄酶（RT）活性是酶的使用聚在60℃下聚合1納摩爾的dNTP的在1分鐘（RA）所需要的量/寡（dT）42作為底物。

酶濃度：

200單位/μl

酶儲存緩沖液：

20mM Tris-HCl（pH 7.5），500mM KCl，1mM EDTA，1mM DTT，50％甘油

酶屬性和新穎活動：

比逆轉錄逆轉錄酶更高的熱穩(wěn)定性，持續(xù)合成能力和保真度，允許從高度結構化或重度修飾的RNA （例如tRNA）和包含富含GC的重復擴增的RNA合成全長，端對端cDNA 。1-9,12,15,18

新型端對端模板轉換活動，可在反轉錄過程中連接RNA-seq或PCR適配器，并且無需單獨的RNA 3'-適配器連接步驟。1這種模板轉換活性極大地促進了鏈特異性RNA-seq文庫的構建，而且比使用隨機六聚體引物或使用RNA連接酶進行銜接子連接的方法具有更小的偏差。1,7,8

從退火引物合成cDNA。將退火的引物應具有推測的T 米 > 60的直徑： C.酶與反應底物混合，在室溫下，通過加入dNTP的反應開始30分鐘的預溫育，建議。新應用的zui宜條件應該通過測試25-450mM NaCl的一系列鹽濃度來確定。

建議用于酶的用途：

1.全面的鏈特異性轉錄組分析。8

2.全細胞，外泌體，血漿和其他無細胞RNA的RNA-seq。7,8,15

3.分析miRNA，tRNA和其他小的非編碼RNA。1-9,12,15

4. RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP和CRAC用于表征RNA-蛋白質相互作用和核糖體分析。1,10,11

5.通過高通量測序鑒定RNA堿基修飾。4,5,13,??14

6.使用諸如SHAPE和DMS修飾的方法進行全基因組或靶向RNA結構作圖。1,16

7.富含GC重復擴增的逆轉錄和定量。18

8.長cDNA的合成。1

9.RT-qPCR。1

10.單鏈DNA-seq。17

11.分析FFPE腫瘤樣本（咨詢InGex）。

酶的優(yōu)點：

1.全面的鏈特異性轉錄組分析。

核糖核碎片，通用人類參考RNA樣品的TGIRT®-seq概括了人類轉錄物和穗突起的相對豐度，與非鏈特異性TruSeq v2相比，并且優(yōu)于鏈特異性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3具有更高的鏈特異性，并消除了TruSeq固有的隨機六聚體引發(fā)的取樣偏差。TGIRT®-seq顯示出更加統(tǒng)一的5'至3'基因覆蓋范圍，并且比TruSeq識別更多的剪接點。TGIRT®-seq能夠在與結構化小型ncRNA相同的RNA-seq中同時分析mRNA和lncRNA，包括tRNA，TruSeq數據集基本上不存在tRNA。8

2.全細胞，外泌體，血漿和其他細胞外RNA的RNA-seq。

快速的處理時間（通過PCR步驟對RNA-seq文庫構建<5小時）; 需要少量的RNA（低ng范圍）; 包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA的全面轉錄譜，包括tRNA，pre-miRNA和其他結構化小型ncRNA的全長讀段; 比常規(guī)方法更少的偏差和更大的鏈特異性。7,8,15

3.通過TGIRT®模板轉換的RNA-seq文庫構建，如RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP，CRAC，??核糖體譜分析。

快速的處理時間（通過PCR步驟對RNA-seq文庫構建<5小時）; 需要少量的RNA（低ng范圍）; 不需要RNA連接酶，通過減少步驟中的步驟來減少偏倚并提率。1,10,11

4.比逆轉錄病毒RT更高的熱穩(wěn)定性，持續(xù)合成能力和鏈置換活性。

使用錨定寡核苷酸（dT）引物，可以構建RNA聚合腺苷酸化的RNA文庫，與沒有ribodepletion步驟的逆轉錄病毒RT相比，具有更均勻的5'至3'覆蓋范圍。1

通過基于毛細管電泳的方法（如SHAPE或DMS結構圖）進行RNA結構作圖，其顯著的讀數長度和更少的提前停止時間比逆轉錄病毒RTs更短。1,16

可以分析含有富含GC的重復擴增的RNA模板。18

能夠合成來自tRNA和其他小型結構化/修飾的ncRNA的全長，端對端cDNA，這些逆轉錄病毒RT難以治療。4-9,12-15     

5.人血漿和大腸桿菌  基因組DNA的ssDNA-seq 。

通過直接在DNA鏈的3'末端啟動DNA合成，同時連接DNA-seq接頭而不進行末端修復，拖尾或連接，以更簡單的工作流程捕獲的DNA末端。能夠分析核小體定位，轉錄因子結合位點，DNA甲基化位點和起源組織。17

參考文獻：

1. Mohr, S., Ghanem, E., Smith, W., Sheeter, D., Qin, Y., King, O., Polioudakis, D., Iyer, V.R., Hunicke-Smith, S. Swamy, S., Kuersten, S., and Lambowitz, A.M. Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next-generation RNA sequencing. RNA 19, 958-970, 2013.
2. Collins, K. and Nilsen, T. Enzyme engineering through evolution: thermostable recombinant group II intron reverse transcriptases provide new tools for RNA research and biotechnology. RNA 19, 1017-1018, 2013.
3. Enyeart, P.J., Mohr, G., Ellington, A.D., and Lambowitz A.M. Biotechnological applications of group II introns and their reverse transcriptases: gene targeting, RNA-seq, and non-coding RNA analysis. DNA 5:2, 2014.
4. Katibah, G.E., Qin, Y., Sidote, D.J., Yao, J., Lambowitz, A.M. and Collins, K. Broad and adaptable RNA structure recognition by the human interferon-induced tetratricopeptide repeat protein IFIT5. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 111, 12025-12030, 2014.  
5. Shen, P.S., Park, J., Qin, Y., Li, X., Parsawar, K., Larson, M.H., Cox, J., Chen, Y., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., Brandman, O., and Frost, A. Rqc2p and 60S ribosomal subunits mediate mRNA-independent elongation of nascent chains. Science 347, 75-78, 2015.
6. Zheng, G., Qin, Y., Clark, W.C., Yi, C., He, C., and Lambowitz, A.M. and Pan, T. Efficient and quantitative high-throughput transfer RNA sequencing. Nat. Methods 12, 835-837, 2015.
7. Qin,Y., Yao,J., Wu,D., Nottingham, R., Mohr, S, Hunicke-Smith, S., Lambowitz, A.M., High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse transcriptases. RNA 22, 111-128, 2016.
8. Nottingham, R.M., Wu, D.C., Qin, Y., Yao, J., Hunicke-Smith, S., and Lambowitz, A.M. RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase. RNA 22, 597-613, 2016.
9. Burke, J.M., Kincaid, R.P., Nottingham, R.M., Lambowitz, A.M., and Sullivan, C.S. DUSP11 activity on tri-phosphorylated transcripts promotes Argonaute association with noncanonical viral microRNAs and regulates steady state levels of cellular non-coding RNAs. Genes & Dev. 30, 2071-2092, 2016.

10. Zarnegar, B.J., Flynn, R.A., Shen, Y., Do, B.T., Chang, H.Y. and Khavari, P.A. irCLIP platform for characterization of protein-RNA interactions. Nat. Methods 13, 489-492, 2016.
11. Haque, N. and Hogg, J.R. Easier, better, faster, stronger: Improved methods for RNA-protein interaction studies, Mol. Cell, 2016 http//dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2016.05.019
12. Bazzini, A.A., del Viso, F., Moreno-Mateos, M.A., Johnstone, T.G., Vejnar, C.E., Qin, Y., Yao, J., Khokha, M.K., and Giraldez, A.J. Codon identity regulates mRNA stability and translation efficiency during the maternal-to-zygotic transition. EMBO J. 35, 2087-2103, 2016.
13. Clark, W.C., Evans, M.E., Dominissini, D., Zheng, G., and Pan, T. tRNA base methylation identification and quantification via high-throughput sequencing. RNA 22, 1771-1784, 2016.
14. Liu et al. ALKBH-mediated tRNA demethylation regulates translation. Cell 167, 816-828, 2016,
15. Shurtleff, M.J., Yao, J., Qin, Y., Nottingham, R.M., Temoche-Diaz, M., Schekman, R., and Lambowitz, A.M. A broad role for YBX1 in defining the small non-coding RNA composition of exosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 114, 8987-8995, 2017.

16. Zubradt, M., Gupta, P., Persad, S., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., and Rouskin, S. DMS-MaPseq for genome-wide or targeted RNA structure probing in vivo. Nature Methods 10.1038/nmeth.4057, 2016.
17. Wu, D.C., and Lambowitz, A.M. Facile single-stranded DNA sequencing of human plasma DNA via thermostable group II intron reverse transcriptase template switching. Scientific Reports 7, 8421, 2017.
18. Carrell, S.T., Tang, Z., Mohr, S., Lambowitz, A.M, and Thorton, C.A. Detection of expanded RNA repeats using thermostable group II intron reverse transcriptase. Nucleic Acids Res. 46, e1, 2018.

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